CHO HCP ELISA Apo
Ọna ELISA immunosorbent-igbesẹ kan ni a lo ninu idanwo yii.Awọn ayẹwo ti o ni CHOK1 HCP nigbakanna fesi pẹlu HRP-ike ewúrẹ egboogi-CHOK1 antibody ati egboogi-CHOK1 agboguntaisan ti a bo lori ELISA awo, nipari lara kan sandwich eka ti ri to-alakoso antibody-HCP-aami antibody.Antigen-antigen ti a ko ni asopọ le yọkuro nipasẹ fifọ awo ELISA.TMB sobusitireti ti wa ni afikun si kanga fun esi to.Idagbasoke awọ naa duro lẹhin fifi ojutu iduro naa kun, ati pe OD tabi iye gbigba ti ojutu ifaseyin ni 450/650nm ni a ka pẹlu oluka microplate.Iye OD tabi iye gbigba jẹ iwọn si akoonu HCP ninu ojutu.Lati eyi, ifọkansi HCP ninu ojutu le ṣe iṣiro ni ibamu si iṣipopada boṣewa.
Ohun elo
A lo ohun elo yii lati ṣe awari akoonu ni iwọn ti CHOK1 awọn iṣẹku amuaradagba sẹẹli ogun ninu awọn ayẹwo.
Calagbara
| S/N | Ẹya ara ẹrọ | Ifojusi | Awọn ipo ipamọ |
| 1 | CHOK1 HCP Standard | 0.5mg/ml | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0.5mg/ml | ≤–20℃, aabo lati ina |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, aabo lati ina |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Duro ojutu | NA | RT |
| 6 | Microplate sealers | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Ga adsorption ami-bo Plates | NA | 2-8℃ |
Ohun elo ti a beere
| Awọn ohun elo / Ohun elo | Ṣe iṣelọpọ | Katalogi |
| Oluka Microplate | Awọn ẹrọ Molecular | Spectra Max M5, M5e, tabi deede |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, tabi deede |
| Alapọpo Vortex | IKA | MS3 Digital, tabi deede |
Ibi ipamọ ati iduroṣinṣin
1.Gbigbe ni -25 ~ -15 °C.
2.Awọn ipo ipamọ jẹ bi a ṣe han ni Table 1;awọn irinše 1-2 ti wa ni ipamọ ≤-20 ° C, 5-6 ti wa ni ipamọ RT,3,4,7,8 ti wa ni ipamọ ni 2-8 ℃;Awọn Wiwulo akoko ni 12 osu.
Ọja sile
1.Ifamọ: 1ng/ml
2.Iwọn wiwa: 3- 100ng/ml
3.Ipese: Intra-assay CV≤ 10%, inter-assay CV≤ 15%
4.HCP agbegbe:> 80%
5.Ni pato: Ohun elo yii jẹ gbogbo agbaye bi o ṣe n ṣe pataki pẹlu CHOK1 HCP ni ominira ti ilana isọdọmọ.
Reagent igbaradi
1.PBST 0.05%
Mu milimita 15 ti 20×PBST 0.05%, ti fomi po ni ddH2O, o si ṣe to 300 milimita.
2.1,0% BSA
Mu 1g ti BSA lati inu igo naa ki o si dilute ni 100 milimita ti PBST 0.05%, dapọ daradara titi ti o fi tu patapata, ki o tọju ni 2-8 ° C.Ifipamọ fomipo ti a pese silẹ wulo fun awọn ọjọ 7.O ti wa ni niyanju lati mura bi ti nilo.
3.Ojutu wiwa 2μg/ml
Mu 48μL ti 0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP ati dilute ni 11,952μL ti 1% BSA lati gba ifọkansi ikẹhin ti ojutu wiwa 2μg/mL.
4.QC ati Igbaradi ti CHOK1 HCP Standards
| Tube Rara. | Atilẹba | Ifojusi | Iwọn didun | 1% BSA | lapapọ Iwọn didun | Ipari |
| A | Standard | 0.5mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Table: Igbaradi ti QC ati Standards
Ilana Assay
1.Mura awọn reagents bi itọkasi ni "Reagent Igbaradi" loke.
2.Mu 50μL ti awọn ajohunše, awọn ayẹwo ati awọn QCs (tọka si Table 3) sinu kanga kọọkan, lẹhinna ṣafikun 100μL ti ojutu wiwa (2μg / mL);Bo awo pẹlu sealer, ki o si gbe awọn ELISA awo lori awọn thermomixer.Incubate ni 500rpm, 25± 3℃ fun wakati 2.
3.Yipada awọn microplate ninu awọn rii ki o si sọ awọn ti a bo ojutu.Pipette 300μL ti PBST 0.05% sinu kanga kọọkan lati wẹ awo ELISA ati sọ ojutu naa silẹ, ki o tun ṣe fifọ ni igba mẹta.Yi awo pada sori aṣọ inura iwe ti o mọ ki o si gbẹ.
4.Ṣafikun 100μL ti sobusitiretiTMB (wo Tabili 1) si kanga kọọkan, di awo ELISA naa, ati incubate ninu okunkun ni 25± 3℃ fun iṣẹju 15.
5.Pipette 100μL ti ojutu iduro sinu kanga kọọkan.
6.Ṣe iwọn gbigba ni iwọn gigun ti 450/650nm pẹlu oluka microplate.
7.Ṣe itupalẹ data nipasẹ SoftMax tabi sọfitiwia deede.Idite ọna kika boṣewa nipa lilo awoṣe ipadasẹhin eekanna mẹrin-paramita.
Standard Curve Apeere
AKIYESI: Ti ifọkansi ti HCP ninu ayẹwo ba kọja opin oke ti ohun ti tẹ boṣewa, o nilo lati fomi po daradara pẹlu ifimimi fomipo ṣaaju idanwo.
AKIYESI
Ojutu iduro jẹ sulfuric acid 2M, jọwọ mu pẹlu iṣọra lati yago fun splashing!
