M-MLV Yiyipada Transcriptase
RevScript Reverse transcriptase jẹ gba nipasẹ imọ-ẹrọ imọ-ẹrọ jiini.O ni agbara iṣelọpọ cDNA ti o ga julọ, iduroṣinṣin igbona ati opin iwọn otutu lenu (to 60°C).Ọja cDNA ti o ṣajọpọ jẹ to 10 kb.O ṣe imudara ibaramu ti awọn awoṣe ati pe o dara fun iyipada iyipada ti awọn awoṣe RNA pẹlu igbekalẹ Atẹle eka tabi awọn jiini ẹda kekere.
Awọn eroja
| Ẹya ara ẹrọ | HCỌdun 2003 B (10,000U) | HCỌdun 2003 B (5*10,000U) | HCỌdun 2003 B (200,000U) |
| Tiranscriptase yiyipada RevScript (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 milimita |
| 5 × Ifipamọ RevScript | 250 μL | 1,25 milimita | 5 milimita |
Ibi ipamọ Ipo
Ọja yii yẹ ki o wa ni ipamọ ni -25 ° C ~ -15 ° C fun ọdun 2.
Unit Definition
Ẹyọ kan ṣafikun 1 nmol ti dTTP sinu ohun elo acid-inoluble ni iṣẹju mẹwa 10 ni 37°C ni lilo Oligo(dT) bi awọn alakoko.
Iṣeto esi
1.Denaturation ti awoṣe RNA (Igbese yii jẹ iyan, denaturation ti awoṣe RNA ṣe iranlọwọ lati ṣii awọn ẹya ile keji, eyiti yoo mu ikore ti cDNA okun akọkọ dara si.)
| Awọn eroja | Iwọn didun (μL) |
| RNase ddH ọfẹ2O | Si 13 |
| Oligo(dT)18 (50 μmol/L) tabi Alakoko Laileto (50 μmol/L) Tabi Awọn alakoko Gene Specific (2 μmol/L) | 1 |
| tabi 1 | |
| tabi 1 | |
| RNA awoṣe | X a |
Awọn akọsilẹ:
1) a: Lapapọ RNA: 1-5 ug tabi mRNA: 1-500 ng
2) Ibẹrẹ ni 65 ° C fun awọn iṣẹju 5, lẹhinna gbigbe lori yinyin lẹsẹkẹsẹ lati tutu fun awọn iṣẹju 2.Finifini centrifugation lati gba omi ifaseyin, ṣafikun ojutu ifasẹyin iyipada bi o ṣe han ninu tabili atẹle.Rọra pipette lati dapọ.
1.Igbaradi ti adalu ifaseyin (iwọn 20 μL)
| Awọn eroja | Iwọn didun (μL) |
| Adalu ti išaaju igbese | 13 |
| 5× Idaduro | 4 |
| Àkópọ̀ dNTP (10nmol/L) | 1 |
| Yiyipada Transscriptase (200 U/μL) | 1 |
| Idalọwọduro RNase (40 U/μL) | 1 |
1.Ṣe iṣesi labẹ awọn ipo wọnyi:
| Iwọn otutu (°C) | Aago |
| 25 °Ca | 5 min |
| 42 °Cb | 15-30 iṣẹju |
| 85 °Cc | 5 min |
Awọn akọsilẹ:
1) a.Gbigbe ni 25°C fun iṣẹju 5 nikan ni a nilo fun lilo awọn hexamers laileto.Jọwọ foju igbesẹ yii nigba lilo Oligo (dT)18tabi Gene Specific alakoko.
2) b.Iwọn otutu iyipada iyipada ti a ṣeduro jẹ 42°C, Fun awọn awoṣe pẹlu awọn ẹya ile-atẹle idiju tabi akoonu GC giga, o gba ọ niyanju lati gbe iwọn otutu iṣesi si 50-55°C.
3) c.Alapapo ni 85°C fun iṣẹju marun 5 lati ma ṣiṣẹ yiyipada transcriptase.
4) Ọja naa le ṣee lo taara ni PCR tabi awọn aati qPCR, tabi tọju ni -20 ° C fun ibi ipamọ igba diẹ.O ti wa ni niyanju lati aliguot awọn ọja ati itaja ni -80 ° C fun gun-igba ipamọ.Yago fun didi-diẹ nigbagbogbo.
5) Ọja naa dara fun ọkan-igbesẹ RT-qPCR, o gba ọ niyanju lati ṣafikun 10-20 U iyipada transcriptase fun gbogbo eto ifaseyin 25μL, tabi diėdiė pọ si iye ti transscriptase yiyipada ni ibamu si ipo gangan.
Awọn akọsilẹ
1.Jọwọ jẹ ki agbegbe idanwo naa di mimọ;Awọn ibọwọ mimọ ati awọn iboju iparada yẹ ki o wọ lakoko iṣẹ.Gbogbo awọn ohun elo ti a lo ninu idanwo yẹ ki o jẹ ọfẹ RNase lati ṣe idiwọ ibajẹ RNase.
2.Gbogbo awọn ilana yẹ ki o ṣe lori yinyin lati ṣe idiwọ ibajẹ RNA.
3.Awọn ayẹwo RNA ti o ga julọ ni a gbaniyanju lati rii daju ṣiṣe giga ti transcription yiyipada.
4.Ọja yii wa fun lilo iwadi nikan.
5.Jọwọ ṣiṣẹ pẹlu awọn aso lab ati awọn ibọwọ isọnu, fun aabo rẹ.
