M-MLV Yiyipada Transcriptase
RevScript Reverse transcriptase jẹ gba nipasẹ imọ-ẹrọ imọ-ẹrọ jiini.O ni agbara iṣelọpọ cDNA ti o ga julọ, iduroṣinṣin igbona ati opin iwọn otutu lenu (to 60°C).Ọja cDNA ti o ṣajọpọ jẹ to 10 kb.O ṣe imudara ibaramu ti awọn awoṣe ati pe o dara fun iyipada iyipada ti awọn awoṣe RNA pẹlu igbekalẹ Atẹle eka tabi awọn jiini ẹda kekere.
Awọn eroja
| Ẹya ara ẹrọ | HCỌdun 2003 B-01 (10,000U) | HCỌdun 2003 B-02 (5*10,000U) | HCỌdun 2003 B-03 (200,000U) |
| Tiranscriptase yiyipada RevScript (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 milimita |
| 5 × Ifipamọ RevScript | 250 μL | 1,25 milimita | 5 milimita |
Ibi ipamọ Ipo
Ọja yii yẹ ki o wa ni ipamọ ni -25 ° C ~ -15 ° C fun ọdun 2.
Unit Definition
Ẹyọ kan ṣafikun 1 nmol ti dTTP sinu ohun elo acid-inoluble ni iṣẹju mẹwa 10 ni 37°C ni lilo Oligo(dT) bi awọn alakoko.
Iṣeto esi
1.Denaturation ti awoṣe RNA (Igbese yii jẹ iyan, denaturation ti awoṣe RNA ṣe iranlọwọ lati ṣii awọn ẹya ile-ẹkọ keji, eyiti yoo mu ikore ti cDNA okun akọkọ dara si.)
| Awọn eroja | Iwọn didun (μL) |
| RNase ddH ọfẹ2O | Si 13 |
| Oligo(dT)18 (50 μmol/L) tabi Alakoko Laileto (50 μmol/L) Tabi Awọn alakoko Gene Specific (2 μmol/L) | 1 |
| tabi 1 | |
| tabi 1 | |
| RNA awoṣe | Xa |
Awọn akọsilẹ:
1) a: Lapapọ RNA: 1-5 ug tabi mRNA: 1-500 ng
2) Ibẹrẹ ni 65 ° C fun awọn iṣẹju 5, lẹhinna gbigbe lori yinyin lẹsẹkẹsẹ lati tutu fun awọn iṣẹju 2.Finifini centrifugation lati gba omi ifaseyin, ṣafikun ojutu ifasẹyin iyipada bi o ṣe han ninu tabili atẹle.Rọra pipette lati dapọ.
1.Preparation ti adalu lenu (iwọn 20 μL)
| Awọn eroja | Iwọn didun (μL) |
| Adalu ti išaaju igbese | 13 |
| 5× Idaduro | 4 |
| Àkópọ̀ dNTP (10nmol/L) | 1 |
| Yiyipada Transscriptase (200 U/μL) | 1 |
| Idalọwọduro RNase (40 U/μL) | 1 |
1.Ṣe iṣesi labẹ awọn ipo wọnyi:
| Iwọn otutu (°C) | Aago |
| 25 °Ca | 5 min |
| 42 °Cb | 15-30 iṣẹju |
| 85 °Cc | 5 min |
Awọn akọsilẹ:
1) a.Gbigbe ni 25°C fun iṣẹju 5 nikan ni a nilo fun lilo awọn hexamers laileto.Jọwọ foju igbesẹ yii nigba lilo Oligo (dT)18tabi Gene Specific alakoko.
2) b.Iwọn otutu iyipada iyipada ti a ṣeduro jẹ 42°C, Fun awọn awoṣe pẹlu awọn ẹya ile-atẹle idiju tabi akoonu GC giga, o gba ọ niyanju lati gbe iwọn otutu iṣesi si 50-55°C.
3) c.Alapapo ni 85°C fun iṣẹju marun 5 lati ma ṣiṣẹ yiyipada transcriptase.
4) Ọja naa le ṣee lo taara ni PCR tabi awọn aati qPCR, tabi tọju ni -20 ° C fun ibi ipamọ igba diẹ.O ti wa ni niyanju lati aliguot awọn ọja ati itaja ni -80 ° C fun gun-igba ipamọ.Yago fun didi-diẹ nigbagbogbo.
5) Ọja naa dara fun ọkan-igbesẹ RT-qPCR, o gba ọ niyanju lati ṣafikun 10-20 U iyipada transcriptase fun gbogbo eto ifaseyin 25μL, tabi diėdiė pọ si iye ti transscriptase yiyipada ni ibamu si ipo gangan.
Awọn akọsilẹ
1.Jọwọ jẹ ki agbegbe idanwo naa di mimọ;Awọn ibọwọ mimọ ati awọn iboju iparada yẹ ki o wọ lakoko iṣẹ.Gbogbo awọn ohun elo ti a lo ninu idanwo yẹ ki o jẹ ọfẹ RNase lati ṣe idiwọ ibajẹ RNase.
2.Gbogbo awọn ilana yẹ ki o ṣe lori yinyin lati dena ibajẹ RNA.
3.High didara RNA awọn ayẹwo ni a ṣe iṣeduro lati rii daju pe ṣiṣe giga ti transcription yiyipada.
4.Ọja yii jẹ fun lilo iwadi nikan.
5.Jọwọ ṣiṣẹ pẹlu awọn ẹwu laabu ati awọn ibọwọ isọnu, fun aabo rẹ.
