Robustart Taq DNA Polymerase
Robustart Taq DNA Polymerase jẹ ibẹrẹ ti o gbona DNA polymerase.Ọja yii ko le ṣe idiwọ iṣesi ti kii ṣe pato ti o dara julọ ti o fa nipasẹ annealing ti kii ṣe pato ti awọn alakoko tabi iṣakojọpọ alakoko ninu ilana igbaradi eto PCR ati imudara.Nitorinaa, o ni iyasọtọ ti o dara julọ ati pe o munadoko diẹ sii fun imudara ti awọn awoṣe ifọkansi kekere, ati pe o dara fun imudara imudara PCR pupọ.Pẹlupẹlu, ọja yii ni ohun elo ti o dara pupọ, ati awọn abajade imudara iduroṣinṣin le ṣee gba ni awọn oriṣi awọn aati PCR.
Awọn eroja
1.5 U/μL Robustart Taq DNA polymerase
2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ ọfẹ) (aṣayan)
3.25 mMgCl2(aṣayan)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ ọfẹ) ko ni dNTP ninu ati Mg²+, jọwọ fi awọn dNTPs ati MgCl kun2nigbati ngbaradi awọn lenu eto.
Awọn ohun elo ti a ṣe iṣeduro
1.Imudara kiakia.
2.Imudara pupọ.
3.Imudara taara ti ẹjẹ, swabs, ati awọn ayẹwo miiran.
4.Wiwa awọn arun atẹgun.
Ibi ipamọ Ipo
-20°C fun ibi ipamọ igba pipẹ, o yẹ ki o dapọ daradara ṣaaju lilo, yago fun didi-diẹ loorekoore.
* Ti ojoriro ba waye lẹhin itutu, o jẹ deede;a ṣe iṣeduro lati dọgbadọgba si iwọn otutu yara ṣaaju ki o to dapọ ati lilo.
Unit Definition
Apakan ti nṣiṣe lọwọ (U) jẹ asọye bi iye henensiamu ti o ṣafikun 10 nmol ti deoxyribonucleotide sinu ohun elo acid-inoluble ni 74°C fun 30mins nipa lilo DNA sperm salmon ti a mu ṣiṣẹ gẹgẹbi awoṣe/alakoko.
Iṣakoso didara
1.SDS-PAGE elekitirophoretic ti nw ti o tobi ju 98%.
2.Ifamọ titobi, iṣakoso ipele-si-ipele, iduroṣinṣin.
3.Ko si iṣẹ-ṣiṣe nuclease exogenous, ko si exogenous endonuclease tabi ibajẹ exonuclease
Awọn ilana
Iṣeto esi
| Awọn eroja | Iwọn didun (μL) | Ifojusi ipari |
| 10 × PCR Buffer II (Mg²+ ọfẹ)a | 5 | 1× |
| dNTPs (10mM dNTP kọọkan) | 1 | 200 μM |
| 25 mMgCl2 | 2-8 | 1-4 mm |
| Robustart Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 U |
| 25 × Alakoko adapob | 2 | 1× |
| Àdàkọ | - | 1 μg / esi |
| ddH2O | Si 50 | - |
Awọn akọsilẹ:
1) a.Ifipamọ naa ko ni dNTP ati Mg²+ ninu, jọwọ fi awọn dNTPs ati MgCl kun2nigbati ngbaradi awọn lenu eto.
2) b.Ti a ba lo fun qPCR/qRT-PCR, awọn iwadii fluorescent yẹ ki o ṣafikun si eto ifaseyin.Nigbagbogbo, ifọkansi alakoko ikẹhin ti 0.2 μM yoo fun awọn abajade to dara;ti iṣẹ iṣe iṣe ko dara, ifọkansi alakoko le ṣe atunṣe ni iwọn 0.2-1 μM.Idojukọ iwadii jẹ iṣapeye nigbagbogbo ni iwọn 0.1-0.3 μM.Awọn adanwo gradient ifọkansi le ṣee ṣe lati wa apapọ ti o dara julọ ti alakoko ati iwadii.
Ilana gigun kẹkẹ gbona
| PCR deedeilana | |||
| Igbesẹ | Iwọn otutu | Aago | Awọn iyipo |
| Pre-denaturation | 95℃ | 1-5 iṣẹju | 1 |
| Denaturation | 95℃ | 10-20 iṣẹju-aaya | 40-50 |
| Annealing / Itẹsiwaju | 56-64℃ | 20-60 iṣẹju-aaya | |
| PCR yiyarailana | |||
| Igbesẹ | Iwọn otutu | Aago | Awọn iyipo |
| Pre-denaturation | 95℃ | 30 iṣẹju-aaya | 1 |
| Denaturation | 95℃ | 1-5 iṣẹju-aaya | 40-45 |
| Annealing / Itẹsiwaju | 56-64℃ | 5-20 iṣẹju-aaya | |
Awọn akọsilẹ
1.Iwọn imudara ti DNA polymerase iyara ko yẹ ki o kere ju 1 kb/10 s.Iwọn iwọn otutu ati isubu, ipo iṣakoso iwọn otutu ati ṣiṣe adaṣe ooru ti awọn ohun elo PCR oriṣiriṣi yatọ pupọ, nitorinaa o gba ọ niyanju lati mu awọn ipo ifasẹyin ti o dara julọ fun ohun elo PCR iyara kan pato.
2.Awọn eto jẹ nyara adaptable, pẹlu ti o ga pato ati ifamọ.
3.Dara fun lilo bi awọn atunmọ wiwa PCR ifamọ giga, ati pe o le ṣee lo ni awọn aati imudara PCR multiplex.
4.5 "→ 3" iṣẹ-ṣiṣe polymerase, 5 "→ 3" iṣẹ exonuclease;ko si 3 "→ 5" iṣẹ exonuclease;ko si iṣẹ ṣiṣe atunṣe.
5.Dara fun idanwo agbara ati pipo ti PCR ati RT-PCR.
6.Ipari 3 'ti ọja PCR jẹ A, eyiti o le ṣe cloned taara sinu fekito T kan.
7.Ọna-igbesẹ mẹta ni a ṣe iṣeduro fun awọn alakoko pẹlu awọn iwọn otutu annealing kekere tabi fun titobi awọn ajẹkù to gun ju 200 bp.
