5× Neoscript Yara RT-qPCR Premix plus-UNG
Nọmba ologbo: HCB5142A
Neoscript Yara RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) jẹ iduroṣinṣin to ga julọ-tube kan ti o da lori ipilẹ iwadii ti o dara fun gbigbe-pada-igbesẹ kan ati PCR pipo (qRT-PCR).O ṣe atilẹyin iṣaju iṣaju ti awọn alakoko ati awọn iwadii ati duro ni iduroṣinṣin lẹhin ibi ipamọ igba pipẹ ni iwọn otutu kekere.Ayẹwo lati ṣe idanwo ni a le ṣafikun taara nigba lilo, laisi ṣiṣi tube afikun / iṣẹ fifin.Ọja yii n pese awọn paati, fun apẹẹrẹ DNA polymerase ti o bẹrẹ gbona, M-MLV, uracil DNA glycosylase (TS-UNG), Inhibitor RNase, MgCl2, dNTPs (pẹlu dUTP dipo dTTP), ati awọn amuduro.Pẹlu jiini títúnṣe apilẹṣẹ iyara yiyipada transcriptase ati DNA polymerase, o ṣee ṣe lati pari imudara PCR laarin awọn iṣẹju 20-40.Reagenti yii nlo ifipamọ pataki fun qPCR pẹlu awọn ensaemusi idapọmọra ti enzymu imudara apanilaya ati enzymu UNG.Nitorinaa, o le gba imudara to dara ti awọn jiini ibi-afẹde ati ṣe idiwọ imudara eke ti o ṣẹlẹ nipasẹ iṣẹku PCR ati idoti aerosol.Reagenti yii jẹ ibamu pẹlu awọn ohun elo PCR pipo fluorescence pupọ julọ lati ọdọ awọn aṣelọpọ bii Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad ati Roche.
Ẹya ara ẹrọ
1.25× Neoscript Yara RTase/UNG Mix
2.5× Neoscript Yara RT Premix Buffer (dUTP)
Awọn ipo ipamọ
Gbogbo awọn paati yẹ ki o wa ni fipamọ ni -20 ℃ fun ibi ipamọ igba pipẹ ati 4℃ fun oṣu mẹta.Jọwọ dapọ daradara lẹhin thawing ati centrifuge ṣaaju lilo.Yago fun didi-diẹ nigbagbogbo.
qRT-PCR Idahun System Igbaradi
| Awọn eroja | 25μLEto | 50μLEto | Ifojusi ipari |
| 5× Neoscript Yara RT Premix Buffer (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25× Neoscript Yara RTase/UNG Mix | 1μL | 2μL | 1× |
| 25× Alakoko-iwadii Mixa | 1μL | 2μL | 1× |
| Àdàkọ RNAb | – | – | – |
| ddH2O | Titi di 25 μl | Titi di 50 μL | – |
1) a.Ikẹhin ipari ti alakoko jẹ nigbagbogbo 0.2μM.Fun awọn abajade to dara julọ, ifọkansi alakoko le jẹ iṣapeye laarin iwọn 0.2-1μM.Ni gbogbogbo, ifọkansi iwadii le jẹ iṣapeye laarin iwọn 0.1-0.3μM.
2) b.Nigbati o ba nlo Ilana PCR ti o yara, jijẹ ifọkansi ti awọn alakoko ati awọn iwadii le ja si awọn abajade imudara to dara julọ, ati pe ipin wọn yẹ ki o wa ni iṣapeye ni ibamu.
3) Awọn oriṣiriṣi oriṣiriṣi awọn ayẹwo ni awọn oriṣiriṣi oriṣiriṣi ati akoonu ti inhibitor ati nọmba ẹda ti jiini afojusun.Iwọn iwọn didun yẹ ki o ṣe akiyesi nipasẹ ipo gangan.Ṣe dilution ti ayẹwo pẹlu omi ti ko ni iparun tabi TE Buffer, ti o ba jẹ dandan.
Idahun Cawọn ipo
| Ilana PCR deede | Fast PCR Ilana | ||||||
| Ilana | Iwọn otutu. | Aago | Yiyipo | Ilana | Iwọn otutu. | Aago | Yiyipo |
| Yiyipada Transcription | 50℃ | 10-20 iṣẹju | 1 | Yiyipada Transcription | 50℃ | 5 min | 1 |
| Polymerase Muu ṣiṣẹ | 95℃ | 1-5 iṣẹju | 1 | Polymerase Muu ṣiṣẹ | 95℃ | 30-orundun | 1 |
| Denaturation | 95℃ | 10-20-orundun | 40-50 | Denaturation | 95℃ | 1-3s | 40-50 |
| Annealing ati Itẹsiwaju | 56-64℃ | 20-60-orundun | Annealing ati Itẹsiwaju | 56-64℃ | 3-20-orundun | ||
Iṣakoso didara
1.Wiwa iṣẹ: ifamọ, pato ati atunwi ti qPCR.
2.Ko si iṣẹ-ṣiṣe nuclease exogenous: ko si exogenous endonuclease ati idoti exonuclease.
Awọn akọsilẹ
1.Iwọn imudara ti DNA polymerase iyara ko kere ju 1kb/10s.Awọn ohun elo PCR oriṣiriṣi ni awọn iyara alapapo ati itutu agbaiye oriṣiriṣi, awọn ipo iṣakoso iwọn otutu ati adaṣe igbona, ati nitorinaa iṣapeye ti alakoko / ifọkansi iwadii ati ọna ṣiṣe ni apapọ pẹlu ohun elo PCR iyara rẹ pato jẹ pataki.
2.Ọja yii ṣe iwulo jakejado, ati pe o dara fun iwadii molikula ifamọ giga.Ọna PCR-igbesẹ mẹta ni a ṣe iṣeduro fun awọn alakoko pẹlu iwọn otutu annealing kekere tabi fun imudara awọn ajẹkù gigun ju 200 bp.
3.Niwọn igba ti awọn amplicon oriṣiriṣi ni ṣiṣe lilo oriṣiriṣi ti dUTP ati ifamọ oriṣiriṣi si UNG, awọn reagents yẹ ki o wa ni iṣapeye ti ifamọ wiwa ba dinku nigba lilo eto UNG.Jọwọ kan si wa fun atilẹyin imọ ẹrọ ti o ba nilo.
4.Lati yago fun amúṣantóbi ti awọn ọja PCR gbigbe, agbegbe esiperimenta igbẹhin ati pipette ni a nilo fun imudara.Ṣiṣẹ pẹlu awọn ibọwọ ki o yipada nigbagbogbo ati ma ṣe ṣii tube PCR lẹhin imudara.
