Rnase A
Ribonuclease A(RNaseA) jẹ polypeptide kan-okun kan ti o ni awọn asopọ disulfide 4 pẹlu iwuwo molikula ti o to 13.7 kDa.RNase Ai jẹ ẹya endoribonuclease ti o ni pataki degrades RNA ti o ni okun ẹyọkan ni awọn iṣẹku C ati U.Ni pato, cleavage mọ asopọ phosphodiester ti a ṣe nipasẹ 5'-ribose ti nucleotide ati ẹgbẹ fosifeti lori 3'-ribose ti pyrimidine nucleotide ti o wa nitosi, ki awọn fosifeti 2,3'-Cyclic jẹ hydrolyzed si 3 ti o baamu. Awọn fosifeti nucleoside (fun apẹẹrẹ, pG-pG-pC-pA-pG ti pin nipasẹ RNase A lati ṣe ipilẹṣẹ pG-pG-pCp ati A-PG).RNase A jẹ ohun ti o ṣiṣẹ julọ ni fifọ RNA oni-okun kan.Iṣeduro iṣẹ ṣiṣe iṣeduro jẹ 1-100 μ G/mL, ibaramu pẹlu ọpọlọpọ awọn eto ifaseyin.Ifojusi iyọ kekere (0-100 mM NaCl) le ṣee lo lati ge RNA ti o ni okun ẹyọkan, RNA ti o ni okun meji, ati awọn ẹwọn RNA ti a ṣẹda nipasẹ isọdọtun RNA-DNA.
Bibẹẹkọ, ni ifọkansi iyọ ti o ga (≥0.3 M), RNase A nikan ni pataki fifọ RNA-okun kan.
RNase A jẹ lilo pupọ julọ lati yọ RNA kuro lakoko igbaradi DNA plasmid tabi DNA genomic.Boya DNAse ko ṣiṣẹ lakoko ilana igbaradi le ni irọrun ni ipa lori iṣesi naa.Ọna ibile ti sise ninu iwẹ omi le ṣee lo lati mu iṣẹ ṣiṣe DNA ṣiṣẹ.Ọja yii ko ni DNAse ati protease ninu, ati pe ko nilo itọju ooru ṣaaju lilo.Ni afikun, ọja yii tun le ṣee lo ni awọn adanwo isedale molikula gẹgẹbi itupalẹ aabo RNase ati itupalẹ ọkọọkan RNA.
Awọn ipo ipamọ
Ọja naa yẹ ki o wa ni ipamọ ni -25 ℃ ~ - 15 ℃ fun ọdun meji.
Awọn pato
| Ifarahan | Lulú |
| Opoiye | 100mg / 1g |
| Iru ọja | RNase A |
Awọn ilana
Eyi jẹ ọkan ninu awọn ọna ti o wọpọ fun igbaradi ojutu ibi ipamọ RNase A.O tun le pese silenipasẹ awọn ọna miiran ni ibamu si awọn ọna ibile ni yàrá tabi awọn iwe itọkasi (biiTutu taara ni 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 tabi ojutu Tris-NaCl)
1. Lo 10 mM sodium acetate (pH 5.2) lati ṣeto 10 mg / mL ti RNase A ipamọ ojutu.
2. Alapapo ni 100 ℃ fun 15 min.
3. Dara si iwọn otutu yara, ṣafikun iwọn 1/10 ti 1 M Tris-HCl (pH 7.4), ṣatunṣe pH rẹ si 7.4 (funapẹẹrẹ, fi 500 milimita ti 10 mg/mL RNase ipamọ ojutu 1 M Tris-HCl, pH7.4).
4. Iṣakojọpọ ni -20 ℃ fun ibi ipamọ tio tutunini, eyiti o le jẹ iduroṣinṣin fun ọdun 2.
[Awọn akọsilẹ]:
Nigbati ojutu RNaseA ba n ṣan labẹ awọn ipo didoju, ojoriro RNase yoo dagba;Sise o ni kekere pH, ati pe ti o ba wa ni ojoriro, o le ṣe akiyesi, eyiti o le fa nipasẹ wiwa awọn aiṣedeede amuaradagba.Ti a ba rii erofo lẹhin sise, a le yọ awọn idoti kuro nipasẹ iwọn-giga iyara (13000rpm), ati lẹhinna ṣajọpọ fun ibi ipamọ didi.
Awọn akọsilẹ
Jọwọ wọ PPE to ṣe pataki, iru ẹwu laabu ati awọn ibọwọ, lati rii daju ilera ati ailewu rẹ.
