UNG Ifamọ otutu
UNG Sensitive otutu (TS-UNG) jẹ gbigba nipasẹ ikosile atunbere ni E. coli.Enzymu naa ṣe itusilẹ ti uracil ọfẹ lati inu uracil ti o ni ẹyọkan ati DNA ti o ni ilopo meji ati pe ko ṣiṣẹ ni ilodi si RNA.Ti a ṣe afiwe pẹlu enzymu UNG ti aṣa ti orisun orisun E. coli, enzymu TS-UNG ni iṣẹ ṣiṣe ti o ga julọ ni awọn iwọn otutu kekere (20℃ ~ 37℃) ati pe o ni itara iwọn otutu ati irọrun mu ṣiṣẹ (50℃), yago fun ibajẹ ti imudara ti o ni dUTP awọn ọja ni iwọn otutu yara nipasẹ iṣẹku ti o le wa lẹhin aiṣiṣẹ ti enzymu UNG ti aṣa.Nitorinaa, enzymu TS-UNG kii ṣe deede fun idasi idena kontaminesonu PCR, ṣugbọn tun baamu daradara pẹlu eto imudara RT-PCR ati pe o le ṣee lo ni idahun idena kontaminesonu RT-PCR.
Ohun elo ti a ṣe iṣeduro
Idena Idena Idoti
Ibi ipamọ Ipo
-20°C fun ibi ipamọ igba pipẹ, o yẹ ki o dapọ daradara ṣaaju lilo, yago fun didi-diẹ loorekoore.
Ifipamọ ipamọ
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glycerol.
Unit Definition
Iye henensiamu ti a beere lati dinku 1µg ti DNA ti o ni okun-ẹyọkan ti o ni awọn ipilẹ dU ninu wakati 1 ni 37°C jẹ ẹyọkan iṣẹ ṣiṣe (U).
Iṣakoso didara
1.SDS-PAGE mimọ elekitirotiki ti o tobi ju 98%
2.Iṣẹ ibajẹ, iṣakoso ipele-si-ipele, iduroṣinṣin
3.Ko si iṣẹ-ṣiṣe nuclease exogenous, ko si exogenous endonuclease tabi kontaminesonu exonuclease.
Awọn ilana
| Awọn eroja | Iwọn didun (μL) | Ifojusi ikẹhin |
| 10 × PCR Buffer (ọfẹ dNTP, Mg²+ofe) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (rọpo dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mMgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mm |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × Alakoko Mixa | 2 | 1× |
| Àdàkọ | - | 1 μg / esi |
| ddH₂O | Si 50 | - |
Akiyesi: a: Ti o ba lo fun qPCR/qRT-PCR, o yẹ ki a ṣafikun iwadii fluorescent sinu eto ifaseyin.Nigbagbogbo, ifọkansi alakoko ikẹhin ti 0.2 μM le fun awọn abajade to dara;nigbati iṣẹ iṣe iṣe ko dara, ifọkansi alakoko le ṣe atunṣe ni iwọn 0.2-1 μM.Nigbagbogbo, ifọkansi iwadii jẹ iṣapeye ni iwọn 0.1-0.3 μM.Awọn adanwo gradient ifọkansi le ṣee ṣe lati wa apapọ ti o dara julọ ti alakoko ati iwadii.
Awọn akọsilẹ
1.Iwọn otutu ifa ti aipe ti TS-UNG henensiamu jẹ iwọn kekere, ati pe o le jẹ iṣapeye ni iwọn 20 ℃ ~ 37 ℃, iwọn lilo ti henensiamu ati akoko ifarahan le jẹ iṣapeye ni iwọn 0.1 ~ 0.5 U, 5 ~ 10 min;ati awọn henensiamu le ti wa ni mu ṣiṣẹ ninu awọn ilana ti yiyipada transcription.
2.O dara fun PCR ati RT-PCR lati ṣe idiwọ ibajẹ.
3.Yago fun didi-diẹ loorekoore, ati ma ṣe fi han si awọn iyipada iwọn otutu nla.
4.Awọn Jiini ti o yatọ lati ṣe alekun ni iṣẹ ṣiṣe lilo oriṣiriṣi ti dUTP ati ifamọ si enzymu UNG, nitorinaa, ti lilo eto UNG ba yori si idinku ninu ifamọ wiwa, eto ifarabalẹ yẹ ki o ṣatunṣe ati iṣapeye, ti o ba nilo atilẹyin imọ-ẹrọ, jọwọ kan si ile-iṣẹ wa.
