DNA isediwon Mini Kit
Ohun elo yii gba eto ifipamọ iṣapeye ati imọ-ẹrọ isọdi ọwọn silica gel, eyiti o le gba pada 70 bp – 20 kb awọn ajẹkù DNA lati awọn ifọkansi ti TAE tabi TBE agarose gel.Ọwọn adsorption DNA le ṣe adsorp DNA ni pataki labẹ ipo iyọ-giga.Ni afikun, ohun elo naa le sọ di mimọ taara awọn ajẹkù DNA lati awọn ọja PCR, awọn eto ifaseyin enzymatic tabi awọn ọja DNA robi ti o gba nipasẹ awọn ọna miiran, ati yọkuro awọn aimọ gẹgẹbi awọn ọlọjẹ, awọn agbo ogun Organic miiran, awọn ions iyọ inorganic ati awọn alakoko oligonucleotide.O le rii daju pe iwẹnumọ le pari laarin awọn iṣẹju 10-15.DNA ti a sọ di mimọ le ṣee lo taara fun ligation, iyipada, tito nkan lẹsẹsẹ enzymu, transcription in vitro, PCR, titele, microinjection, ati bẹbẹ lọ.
Awọn ipo ipamọ
Tọju ni -15 ~ -25 ℃ ati gbigbe ni iwọn otutu yara.
Awọn eroja
| Awọn eroja | (100 rxn) |
| GDP ifipamọ | 80 milimita |
| Ifipamọ GW | 2 × 20 milimita |
| Ifipamọ Elution | 20 milimita |
| FastPure DNA Mini Ọwọn-G | 100 |
GDP ipamọ:DNA abuda ifipamọ.
Ifipamọ GW:Fifọ fifọ;ṣafikun ethanol pipe nipasẹ iwọn itọkasi lori igo ṣaaju lilo.
Ifipamọ Elution:Elution.
FastPure DNA Mini Ọwọn-G:DNA adsorption ọwọn.
Awọn tubes gbigba 2 milimita:Awọn tubes gbigba fun filtrate.
Awọn ohun elo ti a ti pese sile
Awọn tubes sterilized milimita 1.5, ethanol pipe ati isopropanol (nigbati ajẹku DNA ≤100 bp, ṣafikun iwọn didun 1
isopropanol si jeli iwọn didun 1), iwẹ omi.
Ilana idanwo
Ṣafikun milimita 80 ti ethanol lati dilute Buffer GW gẹgẹbi itọkasi lori tag ṣaaju lilo, tọju ni iwọn otutu yara.
Ilana
1. PCR lenu ojutu
Eto isediwon jeli: Ṣafikun iwọn dogba Idamu GDP PCR ero imularada ojutu:Ṣafikun awọn akoko 5 ni ifipamọ iwọn didun
2. GDP Ṣe iṣiro iwọn jeli (100 μl jẹ 100 miligiramu)
Tu jeli
3. Ṣaju ni iwọn 50-55℃
4. Dipọ Wẹ
Ṣafikun 300 μL ti GDP Buffer*
Fi 700 μL ti Buffer GW kun
Fi 700 μL ti Buffer GW kun
5. Elute
Fi 20 – 30μL ti Elution Buffer tabi omi deionized
Awọn akọsilẹ * imularada omi ifaseyin PCR laisi igbesẹ yii
Jeli isediwon eto
1. Lẹhin ti DNA electrophoresis fun ida-ẹjẹ DNA ida, yọ kuro ni adikala kan ti ajẹku DNA lati inu gel agarose labẹ ina UV.A gba ọ niyanju lati lo iwe ifamọ lati fa ọrinrin ti o han gbangba ti gel ati dinku iwọn bibẹ geli nipa yiyọ agarose afikun bi o ti ṣee ṣe bi o ṣe le.Ṣe iwọn bibẹ gel (laisi tube microcentrifuge) lati ṣe iṣiro iwọn didun rẹ: Iwọn 100 mg gelslice jẹ isunmọ 100 μL, ro pe iwuwo jẹ 1g/ml.
2. Fi iwọn didun dogba Buffer GDP, incubate ni 50 ~ 55 ℃ fun 7-10 min (ni ibamu si iwọn gel, ṣatunṣe akoko igbaduro titi ti gel yoo fi tuka patapata).Yi tube pada ni igba meji nigba isọdọtun.
Δ Afikun ti awọn iwọn 1-3 ti GDP Buffer kii yoo ni ipa ṣiṣe imudara imularada DNA.Ti ajẹkù DNA lati gba pada <100 bp, awọn ipele 3 ti Buffer GDP nilo lati ṣafikun;Nigbati gelu geli ti tuka patapata, ṣafikun iwọn didun 1 ti isopropanol ki o dapọ daradara, lẹhinna tẹsiwaju si igbesẹ ti n tẹle.
3. Centrifuge ni ṣoki lati mu apẹẹrẹ wa si isalẹ ti tube, fi FastPure DNA Mini Columns-G sinu Awọn tubes Gbigba 2 milimita, farabalẹ gbe ojutu ti o pọju ti 700 μL ni ẹẹkan.
akoko si awọn ọwọn sisẹ, centrifuge ni 12,000 rpm (13,800 X g) fun 30-60 iṣẹju-aaya.
4. Sọ iyọkuro kuro ki o si fi 300 μL ti Buffer GDP si ọwọn, incubate ni otutu yara fun 1 min, centrifuge ni 12,000 rpm (13,800 X g) fun 30-60 sec.
5. Sọ iyọkuro kuro ki o ṣafikun 700 μL ti Buffer GW (ṣayẹwo ti o ba ti ṣafikun ethanol pipe ni ilosiwaju!) Si iwe, centrifuge ni 12,000 rpm (13,800 X g) fun 30-60 iṣẹju-aaya.
Δ Jọwọ ṣafikun Buffer GW ni ayika odi ọwọn adsorption, tabi ṣafikun Buffer GW ideri ẹhin ki o dapọ si isalẹ fun awọn akoko 2 – 3 lati ṣe iranlọwọ lati fọ iyọ ti o faramọ ogiri tube patapata.
6. Tun igbese 5 tun.
Δ Flushing pẹlu Buffer GW lẹẹmeji le rii daju pe iyọ kuro patapata ati imukuro ipa lori awọn adanwo ti o tẹle.
7. Jabọ àlẹmọ ati centrifuge iwe ti o ṣofo ni 12,000 rpm (13,800 X g) fun 2 min.
8. Fi ọwọn sii sinu tube microcentrifuge 1.5 milimita ti o mọ, fi 20 - 30 μL ti Elution Buffer si aarin ti awọ-ara iwe, incubate fun 2 min, ati lẹhinna centrifuge ni 12,000 rpm (13,800 X g) fun 1 min.Sọ ọwọn naa silẹ, tọju DNA ti o gba ni -20.
Δ Gbigbe supernatant ti igbese 8 si ọwọn lati yọọda lẹẹkansi ati ṣaju Elution Buffer si 55 (nigbati ajẹku DNA> 3 kb) le ṣe iranlọwọ lati mu imudara imularada pọ si.
PCR awọn ọja imularada eto
Ilana yii wulo lati sọ awọn ajẹkù DNA di mimọ lati awọn ọja PCR, eto ifaseyin enzymatic ati awọn ọja robi DNA miiran (pẹlu DNA jiini).Ojutu yii le mu daradara kuro orisirisi awọn nucleotides, awọn alakoko, awọn dimers alakoko, awọn ohun elo iyọ, awọn enzymu ati awọn aimọ miiran.
1. Ni soki centrifuge PCR awọn ọja, enzymatic lenu ojutu, ati awọn miiran DNA robi awọn ọja.Ṣe iṣiro iwọn didun wọn pẹlu pipette ati gbigbe si sterilized 1.5 milimita tabi tube 2 milimita.Fi ddH2O kun titi iwọn didun to 100 μL;lakoko fun DNA genomic pẹlu ifọkansi giga, diluting si 300 μL pẹlu ddH2O yoo ṣe iranlọwọ lati mu imudara imularada dara si.
2. Ṣafikun awọn ipele 5 ti Buffer GDP, dapọ daradara nipasẹ yiyipada tabi vortexing.Ti ajẹku DNA ti iwulo> 100 bp, afikun awọn ipele 1.5 (awọn ayẹwo + Buffer GDP) ti ethanol nilo lati ṣafikun.
3. Fi ọwọn naa pada sinu tube gbigba, gbe mixtrue si ọwọn, centrifuge ni 12,000 rpm (13,800 ×g) fun 30 - 60 iṣẹju-aaya.Ti iwọn didun ojutu ti o dapọ jẹ> 700 µL, fi iwe adsorption pada sinu tube gbigba, gbe ojutu ti o ku si ọwọn adsorption, ati centrifuge ni 12,000 rpm (13,800 × g) fun 30 - 60 iṣẹju-aaya.
4. Iṣẹ atẹle n tọka si igbesẹ 5 - 8 ti 08-1 / eto isediwon gel.
Awọn ohun elo
Awọn ifọkansi oriṣiriṣi ti TAE tabi TBE agarose gel;Awọn ọja PCR, awọn eto ifaseyin enzymatic tabi awọn ọja DNA robi miiran ti o gba nipasẹ awọn ọna pupọ.Awọn ajẹkù ti o gba pada lati70 bp -20 kb.
Awọn akọsilẹ
Fun iwadi nikan lo.Kii ṣe fun lilo ninu awọn ilana iwadii aisan.
1. Fi 80 milimita ti ethanol kun lati dilute Buffer GW bi a ti tọka si tag ṣaaju lilo, tọju ni iwọn otutu yara.
2. Ti GDP Buffer jẹ rọrun lati ṣaju lakoko ipamọ iwọn otutu kekere, o le gbe ni iwọn otutu yara fun akoko kan ṣaaju lilo.Ti o ba jẹ dandan, o le ṣaju ni iwẹ omi 37 ℃ titi ti itusilẹ yoo ti tuka patapata, ati lẹhinna o le ṣee lo lẹhin idapọ.
3. Ṣeto iwọn otutu iwẹ omi si 50 ~ 55 ℃ ni ilosiwaju.
4. Ni 08-1 / Gel isediwon eto igbese 1, dindinku awọn iwọn ti jeli bibẹ yoo significantly din awọn dissolving akoko ati ki o mu imularada ṣiṣe (Linearized DNA jẹ awọn iṣọrọ lati hydrolyze nigba ti nigbagbogbo farahan ni ga otutu).Maṣe fi gel DNA han si UV fun igba pipẹ, nitori ina ultraviolet le fa ibajẹ DNA.
5. Tu jeli ni 08-1/Gel isediwon eto igbese 2 patapata, bibẹkọ ti awọn DNA imularada ṣiṣe yoo wa ni pataki fowo.
6. Preheat Elution Buffer tabi ddH2O si 55 ℃, eyiti o ṣe iranlọwọ lati mu imudara elution DNA dara si.A ṣe iṣeduro lati tọju DNA ni eluent ti 2.5 mM Tris-HCl, pH 7.0 - 8.5.
