Asin Genotyping Apo

Nọmba ologbo: HCR2021A

Ọja yii jẹ ohun elo ti a ṣe apẹrẹ fun idanimọ iyara ti awọn genotypes Asin, pẹlu isediwon robi DNA ati eto imudara PCR.Ọja naa le ṣee lo fun imudara PCR taara lati iru Asin, eti, atampako ati awọn tisọ miiran lẹhin fifọ irọrun nipasẹ Lysis Buffer ati Proteinase k.Ko si tito nkan lẹsẹsẹ moju, isediwon phenol-chloroform tabi ìwẹnumọ ọwọn, eyiti o rọrun ati kikuru akoko n gba awọn idanwo.Ọja naa dara fun imudara awọn ajẹkù ibi-afẹde to 2kb ati awọn aati PCR multiplex pẹlu to awọn orisii 3 ti awọn alakoko.2× Asin Tissue Taara PCR Mix ni DNA polymerase ti a ṣe ni ipilẹṣẹ ninu, Mg²⁺, dNTPs ati eto ifipamọ iṣapeye lati pese iṣẹ ṣiṣe imudara giga ati ifarada inhibitor, ki awọn aati PCR le ṣee ṣe nipasẹ fifi awoṣe kun ati awọn alakoko ati rehydrating ọja naa si 1 ×.Ọja PCR ti o pọ si pẹlu ọja yii ni ipilẹ “A” olokiki ni ipari 3′ ati pe o le ṣee lo taara fun cloning TA lẹhin isọdi mimọ.

Awọn eroja

Awọn ipo ipamọ

Awọn ọja yẹ ki o wa ni ipamọ ni -25 ~ -15 ℃ fun ọdun meji.Lẹhin thawing, Lysis Buffer le wa ni ipamọ ni 2 ~ 8 ℃ fun lilo ọpọ igba kukuru, ati dapọ daradara nigba lilo.

Ohun elo

Ọja yii dara fun itupalẹ knockout Asin, wiwa transgenic, genotyping ati bẹbẹ lọ.

Awọn ẹya ara ẹrọ

1.Išišẹ ti o rọrun: ko si ye lati jade DNA genomic;

2.Ohun elo jakejado: o dara fun imudara taara ti awọn oriṣiriṣi awọn sẹẹli Asin.

Awọn ilana

1.Itusilẹ ti DNA genomic

1) Igbaradi ti lysate

Ti pese lysate tissue ni ibamu si nọmba awọn ayẹwo Asin lati lysed (lysate tissue yẹ ki o pese sile lori aaye ni ibamu si iwọn lilo ati dapọ daradara fun lilo), ati ipin ti awọn reagents ti o nilo fun apẹẹrẹ kan jẹ bi atẹle:

2) Igbaradi Ayẹwo ati Lysis

Niyanju Tissue Lo

Mu iye ti o yẹ fun awọn ayẹwo àsopọ asin ni awọn tubes centrifuge mimọ, ṣafikun 200μL ti lysate tissue tuntun si tube centrifuge kọọkan, vortex ati gbigbọn, lẹhinna incubate ni 55℃ fun 30mins, ati lẹhinna ooru ni 98℃ fun 3mins.

3) Centrifugation

Gbọn lysate daradara ki o si centrifuge ni 12,000 rpm fun 5mins.Supernatant le ṣee lo bi awoṣe fun imudara PCR.Ti o ba nilo awoṣe fun ibi ipamọ, gbe supernatant lọ si tube centrifuge miiran ti o ni ifo ati tọju ni -20℃ fun ọsẹ 2.

2.PCR Amudara

Yọ 2 × Asin Tissue Direct PCR Mix lati -20 ℃ ati ki o yọ lori yinyin, dapọ ni oke ki o ṣeto eto ifa PCR ni ibamu si tabili atẹle (ṣiṣẹ lori yinyin):

Akiyesi:

a) Iye ti a ṣafikun ko yẹ ki o kọja 1/10 ti eto naa, ati pe ti o ba ṣafikun pupọ, imudara PCR le ni idinamọ.

Niyanju PCR Awọn ipo

Akiyesi:

a) Annealing otutu: Pẹlu itọkasi si awọn Tm iye ti alakoko, o ti wa ni niyanju lati ṣeto awọn annealing otutu si kere Tm iye ti alakoko +3 ~ 5℃.

Wọpọ Isoro ati Solusan

1.Ko si awọn ila ìfọkànsí

1) Ọja lysis ti o pọju.Yan iye ti o yẹ julọ ti awoṣe, nigbagbogbo kii ṣe ju 1/10 ti eto naa;

2) Iwọn apẹẹrẹ ti o tobi ju.Dilute lysate ni igba mẹwa 10 ati lẹhinna pọ si, tabi dinku iwọn ayẹwo ati tun-lysis;

3) Awọn ayẹwo ti ara ko ni titun.O ti wa ni niyanju lati lo alabapade àsopọ ayẹwo;

4) Ko dara alakoko didara.Lo DNA genomic fun imudara lati mọ daju didara alakoko ati mu apẹrẹ alakoko dara si.

2.Imudara ti kii ṣe pato

1) Awọn iwọn otutu annealing ti lọ silẹ pupọ ati pe nọmba ọmọ naa ga ju.Mu iwọn otutu annealing pọ si ati dinku nọmba awọn iyipo;

2) Idojukọ awoṣe ti ga ju.Din iye awoṣe tabi dilute awoṣe ni awọn akoko 10 lẹhin imudara;

3) Ko dara alakoko pato.Je ki awọn alakoko oniru.

Awọn akọsilẹ

1.Lati yago fun idoti agbelebu laarin awọn apẹẹrẹ, awọn irinṣẹ iṣapẹẹrẹ lọpọlọpọ yẹ ki o mura, ati dada ti awọn irinṣẹ le di mimọ pẹlu 2% iṣuu soda hypochlorite ojutu tabi olutọpa acid nucleic lẹhin iṣapẹẹrẹ kọọkan ti o ba nilo lilo leralera.

2.A gba ọ niyanju lati lo awọn awọ ara Asin tuntun, ati pe iwọn didun iṣapẹẹrẹ ko yẹ ki o tobi ju lati yago fun ni ipa awọn abajade imudara.

3.Lysis Buffer yẹ ki o yago fun didi-diẹ loorekoore, ati pe o le wa ni ipamọ ni 2 ~ 8℃ fun lilo ọpọ igba kukuru.Ti o ba tọju ni iwọn otutu kekere, ojoriro le waye, ati pe o gbọdọ wa ni tituka ni kikun ṣaaju lilo.

4.Adalu PCR yẹ ki o yago fun didi-diẹ loorekoore, ati pe o le wa ni ipamọ ni 4℃ fun lilo igba diẹ leralera.

5.Ọja yii jẹ nikan fun iwadii esiperimenta imọ-jinlẹ ati pe ko yẹ ki o lo ni ayẹwo ile-iwosan tabi itọju.