Multiplex qPCR ibere Premix
Nọmba ologbo: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) jẹ ojutu-tẹlẹ fun 2 × akoko pipo PCR pipo ti o ni afihan nipasẹ ifamọ giga ati pato, eyiti o jẹ bulu ni awọ, ati pe o ni ipa ti afikun apẹẹrẹ.Ọja yii jẹ 2 × Mix reagenti ti a dapọ tẹlẹ ti o mu ki awọn aati pipo PCR fluorescent mẹrin ṣiṣẹ ni iṣesi kan daradara.Ọja yii ni ọna ajẹsara ti a yipada ni jiini si henensiamu Taq bẹrẹ-gbigbona, imudara ifamọ titobi pupọ ati ni pato.Ni akoko kan naa, ọja yi ti jinna iṣapeye awọn olona-ifojusi saarin, eyi ti o le mu awọn ampilifaya ṣiṣe ti awọn lenu ati igbelaruge awọn munadoko amúṣantóbi ti ti kekere-fojusi awọn awoṣe.Ọja yi le ṣee lo fun genotyping ati multiplex pipo onínọmbà.
Sipesifikesonu
| Gbona Bẹrẹ | Ibẹrẹ gbona ti a ṣe sinu |
| Ọna wiwa | Iwari akọkọ-iwadii |
| PCR ọna | qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Iru apẹẹrẹ | DNA |
Awọn ipo ipamọ
Ọja naa wa pẹlu yinyin gbigbẹ ati pe o le wa ni ipamọ ni -25 ~ -15 ℃ fun ọdun 2.
Awọn ilana
1. IfesiEto
| Awọn eroja | Iwọn didun (μL) | Ifojusi ipari |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Titunto Mix | 12.5 | 1× |
| Adapọ alakoko (10 μmol/L) a | × | 0.1 - 0.5 μmol / L |
| Àkópọ̀ ìwádìí (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox itọkasi dai | 0.5 | 1× |
| Àdàkọ DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | to 25 | - |
Awọn akọsilẹ:Darapọ daradara ṣaaju lilo lati yago fun awọn nyoju ti o pọ julọ lati gbigbọn to lagbara.
a.Ifojusi alakoko: Alakoko Mix ni ọpọlọpọ awọn orisii awọn alakoko, nigbagbogbo alakoko kọọkan ni ifọkansi ikẹhin ti 0.2 μmol/L ati pe o tun le ṣatunṣe laarin 0.1 ati 0.5 μmol/L bi o ṣe yẹ.
b.Idojukọ iwadii: Iparapọ iwadii ni awọn iwadii lọpọlọpọ pẹlu awọn ifihan agbara fluorescence oriṣiriṣi, ati ifọkansi ti iwadii kọọkan le ṣe atunṣe laarin 50 ati 250 nmol/L ni ibamu si ipo kan pato.
1.Itọkasi dye Rox: O ti lo lori ohun elo imudara PCR Akoko Gidi gẹgẹbi Awọn eto Biosystems ti a lo lati ṣe atunṣe aṣiṣe ti ifihan agbara fluorescence ti ipilẹṣẹ laarin awọn kanga;Ọja yii ko ni itọkasi awọ Rox ninu.Cas # 10200 ni a ṣe iṣeduro ti o ba nilo.
2.Dilution awoṣe: qPCR jẹ ifarabalẹ gaan, ati pe o gba ọ niyanju lati dilute awoṣe fun lilo.Ti awoṣe ba jẹ ojutu ọja iṣura cDNA, iwọn didun awoṣe ko yẹ ki o kọja 1/10 ti iwọn didun lapapọ.
3.Eto ifasẹyin: 25μL, 30μL tabi 50 μL ni a ṣe iṣeduro lati rii daju imunadoko ati atunṣe ti imudara jiini ibi-afẹde.
4.Igbaradi eto: Jọwọ mura silẹ ni ibujoko mimọ ti o mọ julọ, ati lo awọn imọran ati awọn tubes ifaseyin laisi iyokuro nuclease;o niyanju lati lo awọn imọran pẹlu awọn katiriji àlẹmọ.Yago fun idoti agbelebu ati idoti aerosol.
2.Eto ifaseyin
| Igbesẹ iyipo | Iwọn otutu. | Aago | Awọn iyipo |
| Ibẹrẹ-denaturation | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 15 iṣẹju-aaya | 45 |
| Annealing / Itẹsiwaju | 60 ℃ | 30 iṣẹju-aaya |
Awọn akọsilẹ:
1.Annealing/Imugboroosi: Iwọn otutu ati akoko le ṣe atunṣe ni deede ni ibamu si iye Tm ti a ṣe apẹrẹ.
2.Gbigba ifihan agbara Fluorescence: Akoko gbigba ifihan agbara fluorescence ti o nilo fun oriṣiriṣi awọn ohun elo wiwa qPCR yatọ, jọwọ ṣeto ni ibamu si opin akoko to kere julọ.Akoko ti ọpọlọpọ awọn ohun elo ti o wọpọ ti ṣeto bi atẹle:
20 iṣẹju-aaya: Awọn eto-ara Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Yara
31 iṣẹju-aaya: Awọn eto-ara Biosystems 7300
32 iṣẹju-aaya: Awọn ilana Biosystems ti a lo 7500
Awọn akọsilẹ
Jọwọ wọ PPE pataki, iru ẹwu lab ati awọn ibọwọ, lati rii daju ilera ati ailewu rẹ!
