Multiplex Ọkan Igbesẹ RT-qPCR Premix-UNG
Nọmba ologbo: HCB5145A
Multiplex Ọkan Igbesẹ RT-qPCR Apo Probe (UDG Plus) jẹ ohun elo PCR pipo pupọ ti o da lori RNA gẹgẹbi awoṣe.Ninu ilana ti idanwo naa, iyipada iyipada ati PCR pipo ni a ṣe ni tube kanna, eyiti o jẹ irọrun iṣẹ ṣiṣe idanwo ati dinku eewu ti ibajẹ.Ninu ohun elo yii, cDNA okun akọkọ jẹ iṣelọpọ daradara nipasẹ ooru-sooro Reverse Transcriptase ati ni iwọn ni titobi nipasẹ HotStart Tag DNA Polymerase.Ohun elo ni akọkọ ni ifipamọ MP iṣapeye, idapọ awọn enzymu, ati bẹbẹ lọ. Ojutu ifipamọ tẹlẹ ni Mg2+ati dNTP.Ni afikun, awọn ifosiwewe ti o le ṣe idiwọ imunadoko imudara PCR ti kii ṣe pato ati mu imudara imudara ti awọn aati qPCR lọpọlọpọ ni a ṣafikun, eyiti o le rii daju ṣiṣe imudara ati gbejade si iṣesi imudara pupọ.Eto dUTP/UDG ni a ṣafikun lati ṣe idiwọ eewu ti ibajẹ aerosol ni imunadoko.
Awọn eroja
1. Ifipamọ
2. Enzymu Mix
Sipesifikesonu
| Gbona Bẹrẹ | Ibẹrẹ gbona ti a ṣe sinu |
| Ọna wiwa | Iwari akọkọ-iwadii |
| PCR ọna | Ọkan igbese RT-qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Iru apẹẹrẹ | DNA |
Awọn ipo ipamọ
Ọja naa wa pẹlu yinyin gbigbẹ ati pe o le wa ni ipamọ ni -25 ~ -15 ℃ fun ọdun kan.O yẹ ki o yago fun loorekooredi-thaw.O ti wa ni niyanju lati fipamọ lọtọ.
Awọn ilana
1.Idahun Eto
| Awọn eroja | Iwọn didun (μL) | Ifojusi ipari |
| 2 × MP Ifipamọ | 12.5 | 1× |
| Enzymu Mix | 1 | - |
| Alakoko/Idapọ Iwadi (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| Àdàkọ RNA | 1-10 | - |
| RNase Ọfẹ H2O | si 25 | - |
Awọn akọsilẹ:
Rii daju lati dapọ daradara ṣaaju lilo, yago fun awọn nyoju ti o pọju ti o ṣẹlẹ nipasẹ gbigbọn iwa-ipa.
a.Ifojusi alakoko: Ijọpọ alakoko pẹlu alakoko multiplex, da lori ipo ifọkansi alakoko ti o dara julọ boya laarin 0.l ati 1.0μM.
b.Idojukọ iwadii: Ijọpọ iwadii pẹlu isamisi isamisi multiplex pipọ ẹgbẹ fluorescent, da lori ipo ifọkansi iwadii to dara julọ boya laarin 0.05 ati 0.5μM.
c.Dilution awoṣe: qPCR jẹ ifarabalẹ gaan ati pe o gba ọ niyanju lati dilute awoṣe.Iwọn iṣakoso Ct dara laarin 20 ati 35.
d.Igbaradi eto: Jọwọ mura silẹ ni tabili iṣẹ ṣiṣe mimọ ultra, ati pipettor ati tube ifaseyin laisi iyoku nuuclease;o ti wa ni niyanju lati lo awọn ibon ori pẹlu àlẹmọ ano.Yago fun idoti agbelebu ati idoti aerosol.
2. Gigun kẹkẹ iṣapeyeIlana
| Yiyipo igbese | Iwọn otutu. | Aago | Awọn iyipo |
| Yiyipada transcription | 50℃a | 20 iṣẹju | 1 |
| Ibẹrẹ-denaturation | 95℃ | 5 min | 1 |
| Idahun imudara | 95℃ | 15 iṣẹju-aaya |
40-45 |
| 60℃ b | 30 iṣẹju-aaya c |
Awọn akọsilẹ:
a.Iyipada yiyipada: Iwọn otutu le yan 42°C tabi 50°C.
b.Idahun imudara: A ṣatunṣe iwọn otutu ni ibamu si iye Tm ti awọn alakoko ti a ṣe apẹrẹ.
c.Gbigba ifihan agbara Fluorescence: Jọwọ ṣeto ilana idanwo ni ibamu si awọn ibeere ti itọnisọna irinse.
Awọn akọsilẹ
Jọwọ wọ PPE to ṣe pataki, gẹgẹbi ẹwu lab ati awọn ibọwọ, lati rii daju ilera ati ailewu rẹ.
