2× Sensi Taara Premix-UNG (Ṣawari qPCR)
Nọmba ologbo: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) jẹ apẹrẹ lati ṣe PCR taara lati awọn ayẹwo laisi isediwon DNA tabi igbaradi ayẹwo.Reagenti yii ni DNA polymerase ti o bẹrẹ, uracil DNA glycosylase (UNG), Inhibitor RNase, MgCl.2, dNTPs (pẹlu dUTP dipo dTTP), ati awọn amuduro, fun PCR pipo (qPCR).Eleyi reagent preforms ga inhibitor-ifarada, ati bayi o le wa ni taara loo si awọn erin ti awọn ayẹwo bi ọfun swab, itọ, egboogi-coagulated gbogbo ẹjẹ, pilasima, ati omi ara lai DNA isediwon.Reagent nlo ifipamọ ohun-ini fun qPCR pẹlu awọn enzymu adalu ti DNA polymerase anti-inhibitory ati enzymu UNG.Nitorinaa, o le gba imudara to dara ti awọn jiini ibi-afẹde ninu awọn apẹẹrẹ ti o ni awọn inhibitors ati ṣe idiwọ imudara rere eke ti o fa nipasẹ iṣẹku PCR ati idoti aerosol.Reagenti yii jẹ ibaramu pẹlu ọpọlọpọ awọn ohun elo PCR pipo fluorescent, gẹgẹ bi Awọn eto Biosystems Applied, Eppendorf, Bio-Rad, Roche ati bẹbẹ lọ.
Awọn eroja
1. 50× SensiDirect Enzyme/UNG Mix
2. 2× SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Awọn ipo ipamọ
Gbogbo awọn paati yẹ ki o wa ni fipamọ ni -20 ℃ fun ibi ipamọ igba pipẹ ati 4℃ fun oṣu mẹta.Jọwọ dapọ daradara lẹhin thawing ati centrifuge ṣaaju lilo.Yago fun didi-diẹ nigbagbogbo.
Ilana gigun kẹkẹ
| Igbesẹ | Iwọn otutu | Aago | Yiyipo |
| Tito nkan lẹsẹsẹ | 50℃ | 2 min | 1 |
| Ṣiṣẹda Polymerase | 95℃ | 1-5 iṣẹju | 1 |
| Denature | 95℃ | 10-20-orundun | 40-50 |
| Annealing / Itẹsiwaju | 56-64℃ | 20-60-orundun |
Awọn itọnisọna paipu
| Reagent | Iwọn didun fun lenu | Iwọn didun fun esi | Ifojusi ipari |
| 2× SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50× SensiDirect Enzyme/UNG Mix | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 25× Alakoko-iwadii Mix1,2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Apeere3,4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Lapapọ iwọn didun | 25 μL | 50 μL | - |
1. Ifojusi ikẹhin ti alakoko jẹ nigbagbogbo 0.2μM.Fun awọn abajade to dara julọ, ifọkansi alakoko le jẹ iṣapeye laarin iwọn 0.2-1μM.
2. Ni gbogbogbo, ifọkansi iwadii le jẹ iṣapeye laarin iwọn 0.1-0.3μM.Idojukọ ti o dara julọ ti iwadii naa jẹ ibatan si ohun elo imudara PCR akoko gidi, iru iwadii, ati iru nkan isamisi Fuluorisenti.Jọwọ tọka si itọnisọna irinse tabi awọn ibeere kan pato ti iwadii fluorescent kọọkan.
3. Awọn oriṣiriṣi oriṣiriṣi awọn ayẹwo ni awọn oriṣiriṣi oriṣiriṣi ati akoonu ti inhibitor ati nọmba ẹda ti jiini afojusun.Iwọn iwọn didun yẹ ki o ṣe akiyesi nipasẹ ipo gangan.Ṣe dilution ti ayẹwo nipasẹ fifi omi ti ko ni iparun kun tabi TE Buffer, ti o ba jẹ dandan.
4. Iwọn iṣeduro ti awọn oriṣiriṣi awọn ayẹwo:
| Apeere | Iwọn didun fun ọkan 50 μL lenu | O pọju ipin |
| Anticoagulated gbogbo ẹjẹ | 2.5 μL | 5% |
| Plasma | 15 μL | 30% |
| Omi ara | 10 μL | 20% |
| Ọfun swab | 10 μL | 20% |
| itọ | 10 μL | 20% |
Iṣakoso didara
1. Iwari iṣẹ: ifamọ, pato ati atunṣe ti qPCR.
2. Ko si iṣẹ-ṣiṣe nuclease exogenous: ko si exogenous endonuclease ati exonuclease idoti.
Awọn akọsilẹ ọja
1. Ọja yii nlo iru aramada ti DNA polymerase ti o gbona-ibẹrẹ, eyiti o le muu ṣiṣẹ ni awọn iṣẹju 1-5.Niwọn igba ti o ti ni imudara ifasilẹ rẹ ti iṣapeye, o dara diẹ sii fun ilopo tabi ọpọ fluorescence pipo PCR nipa lilo ọna iwadii.
2. Ti o ba jẹ pe iye Rn ti imudara PCR ti lọ silẹ pupọ tabi ti o han gbangba ni idinamọ, idinku iye ayẹwo, jijẹ iwọn didun esi tabi dilution iṣaaju ti ayẹwo le mu awọn abajade dara sii.
3. Awọn gbigba ti ẹjẹ, itọ, ito, ọfun swab, bbl yẹ ki o tẹle awọn ibeere awọn ilana iwosan, ati awọn ayẹwo titun le ṣee lo lati dena idibajẹ acid nucleic.
4. Niwọn igba ti awọn amplicon oriṣiriṣi ni iṣẹ ṣiṣe ti o yatọ si dUTP ati ifamọ si UNG, awọn reagents yẹ ki o wa ni iṣapeye ti ifamọ wiwa ba dinku nigba lilo eto UNG.Jọwọ kan si wa fun atilẹyin imọ ẹrọ ti o ba nilo.
5. Lati yago fun amúṣantóbi ti awọn ọja PCR gbigbe laarin ọkan-igbese aati, igbẹhin esiperimenta agbegbe ati pipette wa ni ti beere fun amúṣantóbi ti.Ṣiṣẹ pẹlu awọn ibọwọ ki o yipada nigbagbogbo ati ma ṣe ṣii tube ifaseyin lẹhin imudara PCR.
