Inhibitor Rnase
Murine RNase inhibitor jẹ oludaniloju murine RNase ti o tun ṣe afihan ati mimọ lati E.coli.O sopọ mọ RNase A, B tabi C ni ipin 1: 1 nipasẹ isunmọ ti kii ṣe covalent, nitorinaa idilọwọ iṣẹ ṣiṣe ti awọn enzymu mẹta ati aabo RNA lati ibajẹ.Sibẹsibẹ, Ko munadoko lodi si RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H tabi RNase lati Aspergillus.Murine RNase inhibitor ni idanwo nipasẹ RT-PCR, RT-qPCR ati IVT mRNA, ati pe o ni ibamu pẹlu ọpọlọpọ awọn iwe afọwọkọ Reverse ti iṣowo, awọn polymerases DNA ati awọn polymerases RNA.
Ti a ṣe afiwe si awọn inhibitors RNase eniyan, inhibitor RNase murine ko ni awọn cysteine meji ti o ni itara pupọ si oxidation eyiti o fa aiṣiṣẹ ti inhibitor.Iyẹn jẹ ki o jẹ iduroṣinṣin ni awọn ifọkansi kekere ti DTT (kere ju 1 mM).Ẹya yii jẹ ki o dara fun lilo ninu awọn aati nibiti awọn ifọkansi giga ti DTT jẹ ikolu si iṣesi (fun apẹẹrẹ RT-PCR akoko gidi).
Aohun elo
Ọja yii le jẹ lilo pupọ ni eyikeyi idanwo nibiti kikọlu RNase ṣee ṣe lati yago fun ibajẹ RNA, gẹgẹbi:
1.Akopọ ti okun akọkọ ti cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, ati bẹbẹ lọ.
2.Ṣe aabo fun RNA lati ibajẹ lakoko transcription in vitro in vitro (fun apẹẹrẹ, eto isọdọtun gbogun ti in vitro).
3.Idilọwọ ti iṣẹ-ṣiṣe RNase lakoko iyapa RNA ati isọdọmọ.
Awọn ipo ipamọ
Ọja naa le wa ni ipamọ ni -25～-15 ℃, wulo fun ọdun 2.
Ifipamọ ipamọ
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT ati 50% glycerol.
Itumọ ẹyọkan
Iye ti murine RNase inhibitor ti o nilo lati ṣe idiwọ iṣẹ ṣiṣe ti 5ng ti ribonuclease A nipasẹ 50% ni asọye bi ẹyọkan kan (U).
Iwọn molikula ti amuaradagba
Iwọn molikula ti inhibitor RNase murine jẹ 50 kDa.
Iṣakoso didara
Exonuclease Iṣẹ́:
40 U ti murine RNase inhibitor pẹlu 1 μg λ -Hind III digest DNA ni 37℃ fun wakati 16 ko fa ibajẹ bi a ti pinnu nipasẹ agarose gel electrophoresis.
Iṣẹ ṣiṣe endonuclease:
40 U ti murine RNase inhibitor pẹlu 1μ g λ DNA ni 37℃ fun wakati 16 ko fa ibajẹ bi a ti pinnu nipasẹ agarose gel electrophoresis.
Fifẹ Iṣẹ́:
40U ti murine RNase inhibitor pẹlu 1μ g pBR322 ni 37 ℃ fun wakati 16 ko ni ibajẹ bi a ti pinnu nipasẹ agarose gel electrophoresis.
RNase Iṣẹ-ṣiṣe:
40U ti murine RNase inhibitor pẹlu 1.6μ g MS2 RNA fun 4h ni 37℃ ko ni ibajẹ bi a ti pinnu nipasẹ agarose gel electrophoresis.
E.coli DNA:
40 U ti murine RNase inhibitor ni a ṣe ayẹwo fun wiwa E. coli genomic DNA nipa lilo TaqMan qPCR pẹlu awọn alakoko kan pato fun agbegbe E. coli 16S rRNA.E. coli jenomic DNA koti jẹ ≤ 0.1 pg/40 U.
Notes
1.Violent oscillation tabi saropo yoo ja si enactivation inactivation.
2.The optimum otutu ibiti o ti yi ni inhibitor wà 25-55 ℃ , ati O ti a ti mu ṣiṣẹ ni 65 ℃ ati loke.
3.Awọn iṣẹ ti RNase H, RNase 1 ati RNase T1 ko ni idinamọ nipasẹ murine RNase inhibitor.
4.Idena ti iṣẹ RNase ni a ri ni titobi pH (pH 5-9 gbogbo wọn ṣiṣẹ), ati pe iṣẹ-ṣiṣe ti o ga julọ ni a ṣe akiyesi ni pH 7-8.
5.Niwọn igba ti awọn ribonucleases maa n ṣe idaduro iṣẹ ṣiṣe labẹ awọn ipo aibikita, a gbọdọ ṣe itọju lati yago fun denaturing RNase Inhibitor molecules which have complexed with a ribonuclease.Lati ṣe idiwọ itusilẹ ribonuclease ti nṣiṣe lọwọ, awọn iwọn otutu ti o tobi ju 50 °C ati awọn ifọkansi giga ti urea tabi awọn aṣoju denaturing miiran yẹ ki o yago fun.
