Hotstart Taq DNA Polymerase
Gbona Start Taq DNA Polymerase (atunṣe Antibody) jẹ DNA polymerase thermostable kan ti o gbona lati Thermus aquaticus YT-1, ti o ni iṣẹ ṣiṣe 5′→3′ polymerase ati iṣẹ 5′ flap endonuclease.Ibẹrẹ Taq DNA polymerase ti o gbona jẹ Taq DNA polymerase eyiti a ṣe atunṣe nipasẹ awọn ọlọjẹ Taq thermolabile.Iyipada Antibody pọ si pato, ifamọ, ati ikore ti PCR.
Awọn eroja
| Ẹya ara ẹrọ | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5× HC Taq Buffer | 4×1 milimita | 4×10 milimita | 4×50 milimita | 5×400 milimita |
| Ibẹrẹ Gbona Taq DNA Polymerase (Atitunse Antibody) (5 U/μL) | 0.1 milimita | 1 milimita | 5 milimita | 10×5 milimita |
Awọn ohun elo
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 ni 25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 ati 50% Glycerol.
Ibi ipamọ Ipo
Gbigbe labẹ 0°C ati ki o wa ni ipamọ ni -25°C~-15°C.
Unit Definition
Ẹyọ kan jẹ asọye bi iye henensiamu ti o ṣafikun 15 nmol ti dNTP sinu ohun elo airotẹlẹ acid ni ọgbọn iṣẹju ni 75°C.
Iṣakoso didara
1.Endonuclease aṣayan iṣẹ-ṣiṣe:Isọbọ ti 20 U ti henensiamu pẹlu 4 μg pUC19 DNA fun awọn wakati 4 ni 37℃ yorisi ni ko si ibajẹ ti a rii ti DNA gẹgẹbi ipinnu nipasẹ gel electrophoresis.
2.5kb Lambda PCR:25 Awọn iyipo ti imudara PCR ti 5 ng Lambda DNA pẹlu awọn ẹya 1.25 ti Taq DNA Polymerase ni iwaju 200 µM dNTPs ati 0.2 µM awọn alakoko awọn abajade ninu ọja 5 kb ti a nireti.
3.Iṣẹ-ṣiṣe Exonuclease:Imudaniloju iṣesi 50 µl ti o ni o kere ju 12.5 U ti Taq DNA Polymerase pẹlu 10 nmol 5′-FAM oligonucleotide fun awọn iṣẹju 30 ni 37℃ ko ni ibajẹ ti a rii.
4.Iṣẹ RNase:Iṣeduro 10 µL ti o ni 20 U ti henensiamu pẹlu 1μg ti awọn iwe afọwọkọ RNA fun awọn wakati 2 ni 37°C yorisi ko si ibajẹ ti o rii ti RNA gẹgẹbi ipinnu nipasẹ gel electrophoresis.
5.Aiṣiṣẹ igbona:Rara.
ifaseyin System
| Awọn eroja | Iwọn didun |
| DNA awoṣea | iyan |
| 10 μM Siwaju Alakoko | 0.5 μL |
| 10 μM Yiyipada Alakoko | 0.5 μL |
| dNTP Mix (10mM kọọkan) | 0.5 μL |
| 5× HC Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseb(5U/μL) | 0.125 μL |
| Omi ti ko ni iparun | Titi di 25 μl |
Awọn akọsilẹ:
1) a.
| DNA | Iye |
| Genomic | 1ng-1 μg |
| Plasmid tabi Gbogun ti | 1 oju-1ng |
2) b.Idojukọ ti o dara julọ ti Taq DNA Polymerase le wa lati 5-50 sipo/ml (0.1-0.5 units/25 µL lenu) ni awọn ohun elo pataki.
Ilana gigun kẹkẹ gbona
PCR
| Igbesẹ | Iwọn otutu(°C) | Aago | Awọn iyipo |
| Ibẹrẹ denaturationa | 95 ℃ | 1-3 iṣẹju | - |
| Denaturation | 95 ℃ | 15-30 iṣẹju-aaya | 30-35 iyipo |
| Annealingb | 45-68 ℃ | 15-60 iṣẹju-aaya | |
| Itẹsiwaju | 68 ℃ | 1kb/min | |
| Ipari Ipari | 68 ℃ | 5 min | - |
Awọn akọsilẹ:
1) Denaturation akọkọ ti iṣẹju 1 ni 95°C to fun ọpọlọpọ awọn imudara.Fun awọn awoṣe ti o nira, denaturation gigun ti 2-3mins ni 95°C ni a gbaniyanju.Pẹlu PCR ileto, denaturation 5mins akọkọ ni 95°C ni a gbaniyanju.
2) Igbesẹ annealing jẹ deede 15-60 s.Iwọn otutu mimu da lori Tm ti bata alakoko ati pe o jẹ deede 45-68℃.
