RTL Yiyipada Transcriptase
transcriptase yiyipada RTL jẹ DNA polymerase ti o gbẹkẹle awoṣe RNA ti ko ni iṣẹ exonuclease 3'→5' ati pe o ni iṣẹ RNase H.Enzymu yii le lo RNA gẹgẹbi awoṣe lati ṣajọpọ okun ti o ni ibamu ti DNA, eyiti o le lo si iṣelọpọ cDNA akọkọ-okun, paapaa fun RT-LAMP (ampilifaya isothermal mediated lupu).Ti a bawe pẹlu RTL transcriptase 1.0, ifamọ naa ti ni ilọsiwaju ni pataki, iduroṣinṣin igbona ni okun sii, ati iṣesi ni 65°C jẹ iduroṣinṣin diẹ sii.RTL yiyipada transcriptase (ọfẹ glycerol) le ṣee lo lati ṣeto awọn igbaradi lyophilized, awọn reagents RT-LAMP lyophilized ati bẹbẹ lọ.
Unit Definition
Ẹyọ kan ṣafikun 1 nmol ti dTTP sinu ohun elo acid-precipitable ni iṣẹju 20 ni 50°C ni lilo poly(A)•oligo(dT)25 bi awoṣe-alakoko.
Awọn eroja
| Ẹya ara ẹrọ | HC5008A-01 | HC5008A-02 | HC5008A-03 |
| Tiransikiripiti ti RTL Yiyipada (Glycerol-ọfẹ) (15U/μL) | 0.1 milimita | 1 milimita | 10 milimita |
| 10× HC RTL saarin | 1,5 milimita | 4× 1.5 milimita | 5×10 milimita |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 milimita | 2×1.5 milimita | 3×10 milimita |
Ibi ipamọ Ipo
Gbigbe labẹ 0°C ati ki o wa ni ipamọ ni -25°C~-15°C.
Iṣakoso didara
- Iṣẹku tiEndonuclease:Idahun 50 μL ti o ni 1 μg ti λDNA ati awọn ẹya 15 ti RTL2.0 ti a ṣabọ fun awọn wakati 16 ni 37 ℃ fihan apẹẹrẹ kanna gẹgẹbi iṣakoso odi nipasẹ gel electrophoresis.
- Iṣẹku tiExonuclease:Idahun 50 μL ti o ni 1 μg ti Hind Ⅲ digested λDNA ati awọn ẹya 15 ti RTL2.0 ti a ṣafikun fun awọn wakati 16 ni 37 ℃ fihan apẹẹrẹ kanna gẹgẹbi iṣakoso odi nipasẹ gel electrophoresis.
- Iṣẹku tiNickase:Idahun 50 μL ti o ni 1 μg ti supercoiled pBR322 ati awọn ẹya 15 ti RTL2.0 ti a ṣabọ fun awọn wakati 4 ni 37°C ṣe afihan ilana kanna bi iṣakoso odi nipasẹ gel electrophoresis.
- Iṣẹku tiRNase:Idahun 10 μL ti o ni 0.48 μg ti MS2 RNA ati awọn ẹya 15 ti RTL2.0 ti a ṣabọ fun awọn wakati 4 ni 37°C ṣe afihan ilana kanna gẹgẹbi iṣakoso odi nipasẹ gel electrophoresis.
- E. koli gDNA:Ti ṣe iwọn pẹluE.coliAwọn ohun elo wiwa HCD kan pato, awọn ẹya 15 ti RTL2.0 ni o kere ju 1E. kolijiini.
Iṣeto esi
cDNA Synthesis Ilana
| Awọn eroja | Iwọn didun |
| Àdàkọ RNA a | iyan |
| Oligo(dT) 18 ~ 25(50uM) tabi adapo alakoko ID(60uM) | 2 μL |
| dNTP Mix (10mM kọọkan) | 1 μL |
| Inhibitor RNase (40U/ul) | 0.5 μL |
| Tiranscriptase yiyipada RTL 2.0 (15U/ul) | 0.5 μL |
| 10× HC RTL saarin | 2 μL |
| Omi ti ko ni iparun | Titi di 20 μl |
Awọn akọsilẹ:
1) Iwọn iṣeduro ti Total RNA jẹ 1ng ~ 1μg
2) Iwọn iṣeduro ti mRNA jẹ 50ng ~ 100ng
Thermo-gigun kẹkẹ Awọn ipo fun a baraku lenu:
| Iwọn otutu (°C) | Aago |
| 25 °Ca | 5 min |
| 55 °C | 10 minb |
| 80 °C | 10 min |
Awọn akọsilẹ:
1) Ti a ba lo Adapọ Alakoko, igbesẹ abeabo ni 25°C.
2) Ti a ba lo apopọ alakoko afojusun, igbesẹ abeabo ni 55°C fun 10 ~ 30mins.
Ilana RT-LAMP
| Awọn eroja | Iwọn didun | Ifojusi ipari |
| Àdàkọ RNA | iyan | ≥10 awọn ẹda |
| Àkópọ̀ dNTP (10mM) | 3.5 μL | 1.4 mM |
| FIP/BIP Awọn alakoko (25×) | 1 μL | 1.6 μM |
| F3/B3 Awọn alakoko (25×) | 1 μL | 0.2 μM |
| LoopF/LoopB Awọn alakoko (25×) | 1 μL | 0.4 μM |
| Inhibitor RNase (40U/μL) | 0.5 μL | 20 U / lenu |
| Tiranscriptase yiyipada RTL 2.0 (15U/μL) | 0.5 μL | 7,5 U / lenu |
| Bst V2 DNA Polymerase (8U/μL) | 1 μL | 8 U / Ifesi |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL | 6 mM (Apapọ 8 mM) |
| 10×HC RTL Buffer (tabi 10×HC Bst V2 Buffer) | 2.5 μL | 1 × (2mM Mg2+) |
| Omi ti ko ni iparun | Titi di 25 μl | - |
Awọn akọsilẹ:
1) Illa nipasẹ vortexing ati centrifuge ni soki lati gba.Ibabọ otutu igbagbogbo ni 65 ° C fun wakati kan.
2) Awọn buffers meji jẹ interoperable ati pe wọn ni akopọ kanna.
Awọn akọsilẹ
1.This ọja yoo fẹlẹfẹlẹ kan ti funfun ri to nigba ti o ti fipamọ ni -20 °C.Yọ kuro lati -20 ° C ki o si fi sori yinyin fun bii iṣẹju 10.Lẹhin yo, o le ṣee lo nipasẹ gbigbọn ati dapọ.
2.The cDNA ọja le wa ni ipamọ ni -20 ° C tabi -80 ° C tabi lo lẹsẹkẹsẹ fun PCR lenu.
3.Lati ṣe idiwọ ibajẹ RNase, jọwọ tọju agbegbe idanwo ni mimọ, ki o wọ awọn ibọwọ mimọ ati awọn iboju iparada lakoko iṣẹ.
