Superstart qPCR Premix plus-UNG
Nọmba ologbo: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG jẹ reagenti amọja ti a ṣe apẹrẹ fun agbara PCR Real Time ati awọn aati iwọn lilo wiwa-orisun iwadii, ti dagbasoke ni pataki fun awọn ilana lyophilization.O ni aramada gbona-ibẹrẹ henensiamu Hotstart Taq plus (DG), eyiti o ni iṣẹ ṣiṣe henensiamu Taq ti di edidi ni iwọn otutu yara, ni imunadoko imudara ti kii ṣe pato kan ti o ṣẹlẹ nipasẹ annealing ti kii ṣe pato tabi ipilẹṣẹ dimer alakoko labẹ awọn ipo iwọn otutu kekere, nitorinaa ni ilọsiwaju awọn pato ti awọn ampilifaya lenu.Reagent yii nlo ifipamọ pato qPCR ti iṣapeye ati eto aibikita UNG/dUTP lati ṣaṣeyọri ibẹrẹ gbigbona iyara, imudara ṣiṣe ati ifamọ ti awọn aati qPCR.O le gba awọn iṣuwọn boṣewa ti o dara ni ọpọlọpọ awọn agbegbe iwọn iwọn ati pe o ṣe iwọn iwọn ni deede, ni idilọwọ imunadoko imudara eke ti o fa nipasẹ awọn ọja PCR ti o ku tabi idoti aerosol.Reagenti yii jẹ ibaramu pẹlu ọpọlọpọ awọn ohun elo PCR pipo fluorescent lati ọdọ awọn aṣelọpọ bii Applied Biosystems, Eppendorf, Bio- Rad ati Roche ati bẹbẹ lọ, ati ṣafihan iduroṣinṣin to dara ni fọọmu lyophilized.
Reagenti tiwqn
1. 5× HotstartPremix plus-UNG (Mg2+ofe) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×lyoprotectant (aṣayan)
Awọn ipo ipamọ
Ibi ipamọ igba pipẹ ni -20 ℃;le wa ni ipamọ ni 4 ℃ fun osu mẹta.Illa daradara ṣaaju lilo atiyago fun tun didi ati thawing.
Ilana gigun kẹkẹ
| Ilana | Iwọn otutu. | Aago | Yiyipo |
| Tito nkan lẹsẹsẹ | 50℃ | 2 min | 1 |
| Ṣiṣẹda Polymerase | 95℃ | 1 ~ 5 iṣẹju | 1 |
| Denature | 95℃ | 10-20 iṣẹju-aaya | 40-50 |
| Annealing ati Itẹsiwaju | 56 ~ 64℃ | 20-60 iṣẹju-aaya | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction Syyio Igbaradi
|
Tiwqn |
25µL Iwọn didun |
50µL Iwọn didun |
Ifojusi ipari |
| 5× HotstartPremix plus-UNG(Mg2+ofe) (DG) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250mM mgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 mM |
| 4×lyoprotectant1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25× Alakoko-iwadii Mix2 | 1µL | 2µL | 1× |
| DNA awoṣe3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Si 25µL | Si 50µL | —— |
1. Ifojusi ipari ti 0.2μM fun awọn alakoko maa n mu awọn esi to dara;nigbati iṣẹ iṣe iṣe ko dara, ṣatunṣe ifọkansi alakoko laarin iwọn 0.2-1μM bi o ṣe nilo.Idojukọ iwadii jẹ iṣapeye deede laarin iwọn 0.1-0.3μM nipasẹ awọn adanwo gradient lati wa awọn akojọpọ to dara julọ.
2. Nọmba ẹda ti awọn jiini afojusun ti o wa ninu awọn oriṣiriṣi awọn awoṣe yatọ;ti o ba jẹ dandan, dilution gradient le ṣee ṣe lati pinnu iye afikun awoṣe ti o dara julọ.
3. Eto yii le jẹ lyophilized;nigbati awọn alabara lo eto yii laisi awọn ibeere gbigbe didi, 4 × lyoprotectant le ṣe afikun yiyan; ti awọn ọja ti o gbẹ ba nilo, lakoko ifọwọsi ipele awọn reagents omi ipele ọja, o gbọdọ ṣafikun 4 × lyoprotectant lati rii daju ibamu pẹlu awọn paati eto lyophilized ati awọn ipa.
Nigba ti eto ti wa ni lilod fun didi-gbigbe, mura awọn eto as atẹle:
| Tiwqn | 25µL ifaseyin System |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+ofe) (DG) | 5µL |
| 250mM mgCl2 | 0.45µL |
| 4×lyoprotectant | 6.25µL |
| 25× Alakoko-iwadii Mix | 1µL |
| ddH2O | Si 18 ~ 20µL |
* Ti o ba nilo awọn eto miiran fun didi-gbigbẹ, jọwọ kan si lọtọ.
Ilana Lyophilizationss
| Ilana | Iwọn otutu. | Aago | Ipo | Titẹ |
| Pre-didi | 4℃ | 30 min | Dimu |
1 atm |
| -50℃ | 60 min | Itutu agbaiye | ||
| -50℃ | 180 min | Dimu | ||
| Gbigbe akọkọ | -30 ℃ | 60 min | Alapapo |
Igbale Gbẹhin |
| -30 ℃ | 70 min | Dimu | ||
| Atẹle gbigbe | 25 ℃ | 60 min | Alapapo |
Igbale Gbẹhin |
| 25 ℃ | 300 min | Dimu |
2. Ilana lyophilization ti o wa loke jẹ fun itọkasi nikan.Awọn iru ọja oriṣiriṣi ati awọn ẹrọ gbigbẹ didi ni awọn aye oriṣiriṣi, nitorinaa awọn atunṣe le ṣee ṣe ni ibamu si ganganawọn ipo nigba lilo.
3. Awọn ilana lyophilization ti o yatọ le dara fun awọn titobi titobi ti lyophilizedawọn ọja, nitorina afọwọsi idanwo to gbọdọ ṣee ṣe nigba lilo fun iṣelọpọ iwọn-nla.
Awọn ilana fun lilo lyophilized lulú
1. Ni kukuru centrifuge awọn lyophilized lulú;
2. Fi awoṣe acid nucleic kun si lulú lyophilized ati fi omi kun si 25µL;
3. Illa daradara nipasẹ centrifugation ati ṣiṣe lori ẹrọ.
Iṣakoso Didara:
1. Idanwo iṣẹ-ṣiṣe: ifamọ, pato, atunṣe ti qPCR.
2. Ko si iṣẹ-ṣiṣe nuclease exogenous, ko si exogenous endo/exonuclease kontaminesonu.
Alaye Imọ-ẹrọ:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG nlo henensiamu ti o gbona-ibẹrẹ aramada ti o jẹ ki o bẹrẹ gbigbona iyara laarin awọn iṣẹju 1 ~ 5;nipasẹ agbekalẹ saarin pataki o dara fun awọn aati pipo Fuluorisenti multiplex.
2. O ni pato ti o ga julọ eyiti o ṣe ilọsiwaju ifamọ ti iṣawari iwọn pipo fluorescence PCR, ṣiṣe awọn iṣipopada imudara deede, iye fluorescence gba ilọsiwaju ti o han ni awọn awoṣe ifọkansi kekere, o dara bi awọn ifamọ fluorescence pipo PCR awọn reagents.
3. Fun awọn alakoko pẹlu iwọn otutu annealing kekere tabi to gun ju awọn ajẹkù 200bp, ọna 3-igbesẹ ni a gbaniyanju.
4. Imudara lilo ti dUTP ati ifamọ si enzymu UNG yatọ fun awọn jiini ibi-afẹde ti o yatọ, nitorinaa ti lilo eto UNG ba yori si idinku ninu ifamọ wiwa, eto ifarabalẹ yẹ ki o tunṣe ati iṣapeye.Ti o ba nilo atilẹyin imọ-ẹrọ jọwọ kan si ile-iṣẹ wa.
5. Lo awọn agbegbe igbẹhin ati awọn pipettes ṣaaju ati lẹhin imudara, wọ awọn ibọwọ nigba iṣẹ ati rọpo wọn nigbagbogbo;maṣe ṣii tube ifaseyin lẹhin ipari PCR lati dinku idoti ti awọn ayẹwo nipasẹ awọn ọja PCR.
