Wild Taq DNA Polymerase
Taq DNA Polymerase jẹ thermostable DNA polymerase lati Thermus aquaticus YT-1, ti o ni iṣẹ ṣiṣe 5′→3′ polymerase ati iṣẹ 5′ flap endonuclease.
Awọn eroja
| Ẹya ara ẹrọ | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq Buffer | 2×1 milimita | 2×10 milimita | 2×50 milimita | 5×200 milimita |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.1 milimita | 1 milimita | 5 milimita | 5×10 milimita |
Ibi ipamọ Ipo
Gbigbe labẹ 0°C ati ki o wa ni ipamọ ni -25°C~-15°C.
Unit Definition
Ẹyọ kan jẹ asọye bi iye henensiamu ti o ṣafikun 15 nmol ti dNTP sinu ohun elo airotẹlẹ acid ni ọgbọn iṣẹju ni 75°C.
Iṣakoso didara
1.Ayẹwo Iwa Amuaradagba (SDS-PAGE):Mimo ti Taq DNA polymerase jẹ ≥95% ti pinnu nipasẹ itupalẹ SDS-PAGE.
2.Endonuclease aṣayan iṣẹ-ṣiṣe:O kere ju 5 U ti Taq DNA polymerase pẹlu 1 μg λDNA fun awọn wakati 16 ni awọn abajade 37 ℃ ni ko si ibajẹ wiwa bi a ti pinnu.
3.Iṣẹ-ṣiṣe Exonuclease:O kere ju 5 U ti Taq DNA polymerase pẹlu 1 μg λ -Hind Ⅲ digest DNA fun awọn wakati 16 ni awọn abajade 37 ℃ ni ko si ibajẹ wiwa bi a ti pinnu.
4.Nickase aṣayan iṣẹ-ṣiṣe:O kere ju 5 U ti Taq DNA polymerase pẹlu 1 μg pBR322 DNA fun awọn wakati 16 ni awọn abajade 37°C ni ko si ibajẹ wiwa bi a ti pinnu.
5.Iṣẹ RNase:O kere ju 5 U ti Taq DNA polymerase pẹlu 1.6 μg MS2 RNA fun awọn wakati 16 ni awọn abajade 37°C ni ko si ibajẹ wiwa bi a ti pinnu.
6.E. koliDNA:5 U ti Taq DNA polymerase jẹ iboju fun wiwa E. coli genomic DNA nipa lilo TaqMan qPCR pẹlu awọn alakoko kan pato fun agbegbe E. coli 16S rRNA.E. coli jenomic DNA kontaminesonu jẹ ≤1 Daakọ.
7.Imudara PCR (5.0kb Lambda DNA)- Idahun 50 µL ti o ni 5 ng Lambda DNA pẹlu awọn ẹya marun ti Taq DNA Polymerase fun awọn iyipo 25 ti awọn abajade imudara PCR ni ọja 5.0 kb ti a nireti.
Iṣeto esi
| Awọn eroja | Iwọn didun |
| DNA awoṣea | iyan |
| 10 μM Siwaju Alakoko | 1 μL |
| 10 μM Yiyipada Alakoko | 1 μL |
| dNTP Mix (10mM kọọkan) | 1 μL |
| 10× Taq Ifipamọ | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseb | 0.25 μL |
| Omi ti ko ni iparun | Titi di 50 μl |
Awọn akọsilẹ:
1) Ifojusi ifọkansi ti o dara julọ ti awọn awoṣe oriṣiriṣi yatọ.Tabili ti o tẹle n ṣe afihan lilo awoṣe ti a ṣeduro ti eto ifaseyin 50 µL.
| DNA | Iye |
| Genomic | 1ng-1 μg |
| Plasmid tabi Gbogun ti | 1 oju-1ng |
2) Ifojusi ti o dara julọ ti Taq DNA Polymerase le wa lati 0.25 µL ~ 1 µL ni awọn ohun elo pataki.
IdahunEto
| Igbesẹ | Iwọn otutu(°C) | Aago | Awọn iyipo |
| Ibẹrẹ denaturationa | 95 ℃ | 5 min | - |
| Denaturation | 95 ℃ | 15-30 iṣẹju-aaya | 30-35 iyipo |
| Annealingb | 60 ℃ | 15 s | |
| Itẹsiwaju | 72 ℃ | 1kb/min | |
| Ipari Ipari | 72 ℃ | 5 min | - |
Awọn akọsilẹ:
1) Ipo denaturation akọkọ jẹ o dara fun ọpọlọpọ awọn aati imudara ati pe o le ṣe atunṣe ni ibamu si idiju ti igbekalẹ awoṣe.Ti apẹrẹ awoṣe ba jẹ idiju, akoko iṣaaju-denaturation le faagun si awọn iṣẹju 5 – 10 lati mu ipa denaturation akọkọ dara si.
2) Awọn iwọn otutu annealing nilo lati tunṣe ni ibamu si iye Tm ti alakoko, eyiti a ṣeto ni gbogbogbo si 3 ~ 5 ℃ kekere ju iye Tm ti alakoko;Fun awọn awoṣe eka, o jẹ dandan lati ṣatunṣe iwọn otutu annealing ati fa akoko itẹsiwaju lati ṣaṣeyọri imudara daradara.
